“兩蟲”檢測知多少？

1.什么是兩蟲？

賈第鞭毛蟲和隱孢子蟲是一類寄生于人體和動物體內(nèi)的腸道致病性寄生蟲。

2.感染兩蟲的危害

賈第鞭毛蟲孢囊和隱孢子蟲卵囊屬于病原微生物的休眠體，能夠抵御外界不良環(huán)境，并且能夠耐受常規(guī)水處理中的氯消毒，因此在水環(huán)境中具有較長的存活時(shí)間和潛伏期。

賈第鞭毛蟲和隱孢子蟲引起的消化道感染在世界范圍內(nèi)普遍存在。人或動物通經(jīng)水源性或食源性感染“兩蟲"后，主要癥狀為腹痛、腹瀉、腹脹、嘔吐、發(fā)熱和厭食等，典型病人表現(xiàn)為以腹瀉為主的吸收不良綜合征，腹瀉呈水樣糞便，量大、惡息、無膿血。兒童患者可由于腹瀉，引起貧血等營養(yǎng)不良，導(dǎo)致生長滯緩。對于患有 AIDS 等免疫功能缺陷者，臨床表現(xiàn)為持續(xù)性難以控制的腹瀉，若不及時(shí)對癥治療，將有70%的患者將因此脫水而死。

3.檢驗(yàn)方法

2006年，我國將“兩蟲"指標(biāo)納入國家飲用水檢測指標(biāo)，國標(biāo)中兩蟲檢驗(yàn)方法為免疫磁分離熒光抗體法，2022年我國發(fā)布了飲用水新國標(biāo)GB 5749-2022，代替了06年的飲用水檢測標(biāo)準(zhǔn)，新標(biāo)準(zhǔn)中針對兩蟲檢測新增了檢驗(yàn)方法-濾膜濃縮/密度梯度分離熒光抗體法。

基于標(biāo)準(zhǔn)限值要求，目前水中賈第鞭毛蟲和隱孢子蟲的檢測方法主要分為三個(gè)步驟：濃縮富集、分離純化和染色鏡檢。其中，濃縮富集和分離純化是影響檢測方法成本和回收率的關(guān)鍵步驟。

3.1免疫磁分離熒光抗體法

免疫磁分離熒光抗體法源自EPA 1623，檢測設(shè)備和試劑耗材依賴進(jìn)口。

它的濃縮方法為濾囊/濾芯過濾法，可以用較高的流速處理大量水樣，但由于孢囊/卵囊的黏附作用而導(dǎo)致部分孢囊/卵囊難以洗脫，并且濾囊/濾芯約 2500～3000 元/樣，檢測成本高昂。免疫磁分離法根據(jù)特異性的抗原抗體反應(yīng)具有較好的純化效果，該方法中使用的磁珠約 500 元/樣，成本相對較高。

3.2濾膜濃縮/密度梯度分離熒光抗體法

濾膜濃縮/密度梯度分離熒光抗體法針對高濁度水采用沉淀離心和低濁度水采用膜過濾溶解純化的方法，實(shí)現(xiàn)替代被美國壟斷的囊過濾的純化方法，打破美國的專利布局壟斷，擁有完整的兩蟲檢測新方法，檢測成本僅為美國EPA 1623方法的20%；

該方法在2011-2015年完成全國供水行業(yè)內(nèi)部測試，2018年被納入住建部行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《城鎮(zhèn)供水水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法》CJ/T 141-2018；2018-2019年順利完成衛(wèi)健委組織國家標(biāo)準(zhǔn)《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法》GB/T 5750修訂所必須的全國驗(yàn)證，已被納入新版國標(biāo)檢測方法。

絮凝沉淀法對于孢囊/卵囊的濃縮具有很好的效果，針對濁度大于等于 20 NTU 的水樣采用此濃縮方法。濾膜溶解法是一種對于孢囊/卵囊具有較高回收率的濃縮方法，不僅能有效降低膜上附著物質(zhì)在轉(zhuǎn)移過程中的損失，并且可以解決濾囊/濾芯過濾法成本較高和孢囊/卵囊難以洗脫的問題，針對濁度小于20 NTU 的水樣即采用此法。

密度梯度離心法是將 Percoll 與蔗糖混合作為密度梯度離心介質(zhì)，使用后在確保較好回收率的同時(shí)降低了試劑成本。

4.總結(jié)

2022新標(biāo)準(zhǔn)中采用的濾膜濃縮/密度梯度分離熒光抗體法，該方法在保障 GB/T 5750-2006 方法回收率的基礎(chǔ)上，降低設(shè)備投入 75%，降低耗材成本 85%，使隱孢子蟲檢測成本從 3000 元/樣品降低到 300 元/樣品。

綜合我國現(xiàn)有檢測方法，濾膜濃縮/密度梯度分離熒光抗體法具有穩(wěn)定可靠、成本低廉、檢測靈敏的優(yōu)點(diǎn)，對于生活飲用水中賈第鞭毛蟲和隱孢子蟲檢測標(biāo)準(zhǔn)方法的建立具有參考價(jià)值。