從哪些方面了解和選擇紫外分光光度計(jì)

　　紫外分光光度計(jì)，就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。紫外分光光度計(jì)可以在紫外可見光區(qū)任意選擇不同波長的光。物質(zhì)的吸收光譜就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量，相應(yīng)地發(fā)生了分子振動(dòng)能級躍遷和電子能級躍遷的結(jié)果。

　　從紫外分光光度計(jì)出現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室的工作臺之后，已經(jīng)形成了一種能解決廣泛難題的儀器，從單一波長的測量到高性能多光譜的測量分析。實(shí)驗(yàn)室選擇時(shí)需要根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)室的需要和目的用途來考慮，光學(xué)構(gòu)造和光源、探測方法、樣品類型和數(shù)據(jù)處理等都是要考慮的因素。

　　光學(xué)構(gòu)造

　　一般來說，紫外光分光光度計(jì)分為單光束和雙光束兩類。顧名思義，單光束型主要是依賴單束光進(jìn)行測量。一束給定波長的光通過對照物，然后再通過實(shí)際樣品溶液，就能得到吸光結(jié)果。

　　雙光束型則是通過一個(gè)斬光輪(mirrored chopper wheel)將一束光分成兩束，分別測量對照樣品和實(shí)際樣品。可以最小化光漂移(lamp drift)和減少測量時(shí)間。一些雙光型光度計(jì)不利用斬光輪，而是利用一種光束分光器來代替，將一束光分成兩束平行的光然后同時(shí)測量對照樣品和目的樣品。因?yàn)樵黾恿藴y量的速度，所以雙光束分光光度計(jì)在測量一些溶液隨時(shí)間動(dòng)態(tài)變化的研究中大有用處。

　　光源和檢測方法

　　分光光度計(jì)的光譜也是需要考慮的一個(gè)重要因素。實(shí)驗(yàn)室研究人員希望省錢購入專門儀器定量核酸、蛋白或者細(xì)菌的生長情況。例如Amersham Biosciences of Piscataway公司的GeneQuant II能在230、260、280、320、595和600nm的波長下測量樣品。果果需要更大的靈活性，研究者可以考慮一種更高性能的寬光譜儀器，可以程序性地進(jìn)行ELISAs分析和比色分析。

　　紫外分光光度計(jì)一般覆蓋190nm和380nm波長，通常利用氘燈照明。一些特殊的儀器可以提供滿足光子學(xué)和半導(dǎo)體研究需要的光譜范圍。Varian of Palo Alto公司的Cary Deep UV和Hitachi High Technologies of Tokyo的U-7000 Automated Vacuum UV System就是這樣的儀器。

　　一些儀器具有多種光源供選擇：紫外光、可見光和甚至紅外光(780 nm 至3,000 nm)。鎢燈和鹵素?zé)粢话阒桓采w可見光部分(大約380 nm 到800 nm)。而氙燈則可以覆蓋紫外光和可見光區(qū)域。

　　分光光度計(jì)的帶寬(bandwidth)很大程度上依賴于單色儀的狹縫的寬度。可以投射出實(shí)驗(yàn)精確要求的光譜。一種嚴(yán)格帶寬使得儀器能對復(fù)雜的混合物進(jìn)行高分辨率的吸光測量。可變的單色儀的狹縫寬度能使一臺分光光度計(jì)滿足多種實(shí)驗(yàn)需要。

　　為了測量吸光值，分光光度計(jì)制造商通常使用光電倍增管(photo-multiplier tubes，PMTs)和光敏二極管。PMTs提供快速的反應(yīng)時(shí)間和良好的靈敏度，并且可以在紫外光譜調(diào)節(jié)至特定的范圍。但一些制造商依賴于光敏二極管的動(dòng)態(tài)范圍在數(shù)秒內(nèi)行使所有的光譜測量。

　　樣品類型

　　在大部分的樣品類型中，分光光度計(jì)可接受樣品孔、小玻璃管cuvette、吸漿管和微孔板。微孔板主要是滿足高通量的需要和大規(guī)模的實(shí)驗(yàn)室需求。但盡管對于小實(shí)驗(yàn)室來說，制造商仍然提供了多種容器轉(zhuǎn)換器來滿足通量的要求和減少實(shí)驗(yàn)時(shí)間。

　　用小試管cuvette裝樣品容量一般從1 μl-5ml，并且一些儀器裝備了各種樣品固定物來滿足各種改變需要。體現(xiàn)了柔韌性。

　　數(shù)據(jù)管理

　　大部分單機(jī)型的分光光度計(jì)包含了驅(qū)動(dòng)儀器運(yùn)行和管理數(shù)據(jù)的軟件。高性能的儀器，通常與PC機(jī)一起聯(lián)用，需要從制造商提供額外的軟件。同時(shí)用戶也可以選擇升級軟件以滿足他們的需要。

　　另外一個(gè)值得考慮的因素是數(shù)據(jù)的最終使用。各獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室都有各自感興趣的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。例如一些藥物機(jī)構(gòu)需要考慮美國FDA的要求和歐聯(lián)盟的藥物評價(jià)機(jī)構(gòu)的要求選擇不同的數(shù)據(jù)處理方式。